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大鼠乙酰膽堿 (ACh)酶聯(lián)免疫分析
更新時間:2015-08-10   點擊次數(shù):1058次

大鼠乙酰膽堿  (ACh)酶聯(lián)免疫分析
本試劑盒僅供研究使用
檢測范圍:96T
15 pmol/L - 400 pmol/L
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中乙酰膽堿  (ACh)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠乙酰膽堿   (ACh)水平。用純化的大鼠乙酰膽堿   (ACh)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入乙酰膽堿(ACh),再與 HRP標記的乙酰膽堿   (ACh)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的乙酰膽堿  (ACh)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm  波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠乙酰膽堿   (ACh)濃度。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
2   酶標試劑
標準品(640 pmol/L)  0.5ml×1瓶
3   酶標包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1份
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟大鼠乙酰膽堿  (ACh)酶聯(lián)免疫分析
1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
320 pmol/L
160 pmol/L
80 pmol/L
40 pmol/L
20 pmol/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  5號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  4號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  3號標準品加入  150μl標準品稀釋液
150μl的  2號標準品加入  150μl標準品稀釋液
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復 5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):大鼠乙酰膽堿  (ACh)酶聯(lián)免疫分析
計算以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本  OD值大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

上海晶抗生物工程有限公司

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