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綿羊NK細(xì)胞(NK)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
更新時(shí)間:2015-09-02   點(diǎn)擊次數(shù):1038次
  綿羊NK細(xì)胞(NK)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
  
  本試劑盒僅供研究使用。
  
  使用目的:
  
  本試劑盒用于測(cè)定綿羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中NK細(xì)胞(NK)含量。
  
  實(shí)驗(yàn)原理
  
  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中綿羊NK細(xì)胞(NK)水平。用純化的綿羊NK細(xì)胞(NK)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入NK細(xì)胞(NK),再與HRP標(biāo)記的NK細(xì)胞(NK)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TB顯色。TB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的NK細(xì)胞(NK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中綿羊NK細(xì)胞(NK)濃度。
  
  試劑盒組成
  
  30倍濃縮洗滌液
  
  20ml×1瓶
  
  6ml×1瓶
  
  12孔×8條
  
  6ml×1瓶
  
  6ml×1瓶
  
  6ml×1/瓶
  
  終止液
  
  6ml×1瓶
  
  2酶標(biāo)試劑
  
  標(biāo)準(zhǔn)品(320nmol/L)0.5ml×1瓶
  
  3酶標(biāo)包被板
  
  4樣品稀釋液
  
  5顯色劑A液
  
  6顯色劑B液
  
  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  
  1.5ml×1瓶
  
  1份綿羊NK細(xì)胞(NK)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
  
  10說(shuō)明書
  
  11封板膜
  
  12密封袋
  
  2張
  
  1個(gè)
  
  標(biāo)本要求
  
  1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
  
  2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
  
  操作步驟
  
  1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
  
  160nmol/L
  
  80nmol/L
  
  40nmol/L
  
  20nmol/L
  
  10nmol/L
  
  5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
  
  4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
  
  3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
  
  2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
  
  1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
  
  150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  
  150µl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  
  150µl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  
  150µl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  
  150µl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  
  2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測(cè)樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
  
  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  
  配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  
  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  
  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。
  
  溫育:操作同3。
  
  洗滌:操作同5。
  
  顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  
  10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
  
  11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
  
  操作程序總結(jié):
  
  計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
  
  注意事項(xiàng)綿羊NK細(xì)胞(NK)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
  
  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  
  2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
  
  3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  
  4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
  
  5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  
  6.底物請(qǐng)避光保存。
  
  7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
  
  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  
  9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
  
  保存條件及有效期
  
  1.試劑盒保存:;2-8℃。
  
  2.有效期:6個(gè)月
上海晶抗生物工程有限公司

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