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兔抗環(huán)瓜(CCP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
更新時(shí)間:2015-10-19   點(diǎn)擊次數(shù):923次

兔抗環(huán)瓜(CCP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
本試劑盒用于測(cè)定兔血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗環(huán)瓜(CCP)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中兔抗環(huán)瓜體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 抗環(huán)瓜再與 HRP標(biāo)記的抗體顯色。TMB在  HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的抗環(huán)瓜 (CCP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD(CCP)。用純化的抗(CCP),,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物  TB值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中兔抗環(huán)瓜試劑盒組成(CCP)濃度。
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
1份
2   酶標(biāo)試劑
標(biāo)準(zhǔn)品(160ng/L)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3   酶標(biāo)包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
10   說(shuō)明書(shū)
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個(gè)
標(biāo)本要兔抗環(huán)瓜(CCP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過(guò)(HRP)活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
80ng/L
40ng/L
20ng/L
10ng/L
5ng/L
5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

溫育:用封板膜封板后
37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜重復(fù) 5次,拍干。30秒后棄去,如此
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
操作程序總:
計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)兔抗環(huán)瓜(CCP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有析出,稀釋時(shí)可在浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月


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