臨床ELISA測定現(xiàn)通常為采用手工操縱的以微孔板條為固相的測定模式，測定操縱非常簡樸，一般涉及到標(biāo)本的收集保留、試劑預(yù)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判定和結(jié)果講演及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。濺出會(huì)對(duì)臨近孔產(chǎn)生污染。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時(shí)間和體位方面的影響。ELISA試劑盒作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相長進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必需在一定的溫度前提下反應(yīng)一定的時(shí)間。

    應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點(diǎn)是：ELISA試劑盒加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對(duì)用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)。

    溫育是ELISA試劑盒測定中影響測定成敗zui為樞紐的一個(gè)因素。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。