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ELISA試劑盒的洗滌步驟
更新時間:2016-11-03   點擊次數(shù):971次

ELISA試劑盒的洗滌在ELISA進(jìn)程中雖不是一個反應(yīng)進(jìn)程,但卻也決議著實驗的勝敗。ELSIA?是靠洗刷來到達(dá)別離游離的和聯(lián)絡(luò)的酶符號物的目的。通過洗刷以*殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體聯(lián)絡(luò)的物質(zhì),以及在反應(yīng)進(jìn)程中非特異性地吸附于固相載體的煩擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗刷時又應(yīng)把這種非特異性吸附的煩擾物質(zhì)洗刷下來。可以說在ELISA操作中,洗刷是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)導(dǎo)致操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)厲按懇求洗刷,不得大意。
洗刷的方法除某些ELISA儀器配有格外的主動洗刷儀外,手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種,進(jìn)程如下:
浸泡式 
a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
b.用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去);
c.浸泡,即將洗刷液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖晃,浸泡時間不可隨意縮短;
d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干;
e.重復(fù)操作c和d,洗刷3-4次(或按說明規(guī)矩)。
ELISA試劑盒在間接法中如本底較高,可增加洗刷次數(shù)或延伸浸泡時間。
微量滴定板多選用浸泡式洗刷法。
洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。
聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的聯(lián)絡(luò)是疏水性的,非離子型洗刷劑既含疏水基團(tuán),也含親水基團(tuán),其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵聯(lián)絡(luò),然后削弱蛋白質(zhì)與固相載體的聯(lián)絡(luò),并借助于親水基團(tuán)和水分子的聯(lián)絡(luò)效果,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液情況,然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑通常是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低實驗的靈敏度。
流水沖刷式 流水沖刷法開端用于小珠載體的洗刷,洗刷液僅為蒸餾水乃至可用自來水。
洗刷時附接一格外設(shè)備,使小珠在流水沖擊下不斷地翻滾淋洗,持續(xù)沖刷2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。
浸泡式猶如盆浴,流水沖刷式則比方淋浴,其洗刷效果更為*,且也簡潔、敏捷。已有實驗標(biāo)明,流水沖刷式一樣也適用于微量滴定板的洗刷。

ELISA試劑盒洗刷時設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗刷效果更佳。

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