ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)作用影響較大，如不留意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。
將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟示，進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
下面剖析Elisa實(shí)驗(yàn)操作中可能影響成果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法
一、挑選試劑
挑選質(zhì)量的檢測(cè)試劑，嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、 孵育
可能原因：
1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸騰，吸附于孔壁，難于清洗*; 2) 孵育時(shí)刻人為延伸，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：
1) 貼封片或加蓋; 2) 按闡明過(guò)程嚴(yán)厲控制操作時(shí)刻。
三、洗板
可能原因：
1) 選用手藝洗板，孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*;洗板針阻塞，抽吸不*;洗板不暢，導(dǎo)致洗板作用差。 3) 反響板過(guò)多形成洗板等候時(shí)刻長(zhǎng)。
解決辦法：
1) 確保洗液注滿各孔，洗板針疏通，洗完板后在吸水紙(挑選干凈、無(wú)或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; 2) 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
四、加樣
可能原因：
1)血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣; 2)手藝操作中，加樣板過(guò)多形成加樣后放入孵箱前等候時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
解決辦法：
1)標(biāo)本為血清：將血液先天然寄存1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：有必要使用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管，采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次，放置一段時(shí)刻后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要儲(chǔ)存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2)加樣后及時(shí)放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。 4)如果選用AT或其他全自動(dòng)加樣，挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5)標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。