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酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELASA)具體操作步驟
更新時(shí)間:2019-03-29   點(diǎn)擊次數(shù):7206次

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELASA)具體操作步驟

ELASA是一種用酶標(biāo)記抗原或抗體,在固相反應(yīng)板上進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的方法。常用于檢測(cè)體液中的微量抗原和抗體,具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、容易判斷等優(yōu)點(diǎn)。其檢測(cè)方法、注意事項(xiàng)、結(jié)果分析等詳見(jiàn)檢測(cè)試劑的說(shuō)明書(shū)。本實(shí)驗(yàn)以雙抗體夾心法為例檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗原介紹如下:

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

要求了解試驗(yàn)原理,試驗(yàn)方法及結(jié)果分析。

實(shí)驗(yàn)材料

1.標(biāo)本:待檢人血清

2.試劑:酶標(biāo)抗體(抗HBs)、HBsAg陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照、洗滌液、顯色劑A、B,終止液

3.器材:已被抗體包被的微量反應(yīng)板(48孔)、微量移液管、酶標(biāo)儀等。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

1.在微量反應(yīng)板每孔加入待檢標(biāo)本50μl,設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照各2孔,每孔加入陽(yáng)性(或陰性)對(duì)照各1滴,并設(shè)空白對(duì)照1孔。

2.每孔加入酶結(jié)合物1滴(空白對(duì)照除外),充分混勻,封板,置37℃孵育30分鐘。

3.棄去孔內(nèi)液體,洗滌液注滿各孔,靜置5秒,甩干,重復(fù)5次后拍干。

4.每孔加顯色劑A液、B液各1滴,充分混勻,封板,置37℃孵育15分鐘。

5.每孔加終止液1滴,充分混勻。

6.用酶標(biāo)儀讀數(shù),取波長(zhǎng)450nm,先用空白孔校零,然后讀取各孔OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與評(píng)價(jià)

樣品OD值≥2.1陰性對(duì)照平均OD值,判斷為陽(yáng)性,否則為陰性。陰性對(duì)照OD值低于0.05作0.05計(jì)算,高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。

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