原代細胞培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，是建立細胞系的步，其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持。
 

　　那么關于原代細胞培養(yǎng)時有哪些問題呢?下面就為大家來一一解答。
 

　　1、原代細胞與細胞系有什么區(qū)別?
 

　　根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。
 

　　細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。
 

　　但實際上，經(jīng)過長時間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細胞系隨著代數(shù)的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
 

　　需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群，除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。
 

　　2、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別?
 

　　倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍，通常是指細胞指數(shù)或對數(shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的，是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。
 

　　3、接收到的凍存細胞該如何處理?
 

　　收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快，以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。
 

　　4、凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)?
 

　　(1) 將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。
 

　　(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉，直到管內(nèi)物體*融化。
 

　　(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉入無菌環(huán)境。
 

　　(4) 用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
 

　　(5) 打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正常現(xiàn)象)。
 

　　(6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。
 

　　(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
 

　　(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃，5%CO2，95%空氣)
 

　　(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。