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科學(xué)實(shí)驗(yàn)站。叫你知道ELISA試劑盒原理
更新時(shí)間:2013-07-29   點(diǎn)擊次數(shù):1965次

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
在測定時(shí),ELISA試劑盒受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。
用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。
再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達(dá)到很高的敏感度。
操作步驟:
1.從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條,ELISA試劑盒未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓 實(shí)自封條,密封口袋,放回4℃。
2.空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液,其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔),用封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱孵育90分鐘。
3.提前20分鐘準(zhǔn)備生物素化抗體工作液。
4.洗板5次。
5.空白孔加生物素化抗體稀釋液,其余孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱孵育60分鐘。
6.提前20分鐘準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置。
7.洗板5次。
8.空白孔加酶結(jié)合物稀釋液,其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱,避光孵育30分鐘。
9.打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。
10.洗板5次。
11.加入顯色底物(TMB)100ul/孔,避光36℃孵箱,避光孵育15分鐘。
12.加入終止液100ul/孔, ELISA試劑盒混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內(nèi))。
在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果。
13.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束。
建議保存酶標(biāo)板框,以備下次或者今后試驗(yàn)使用。

 

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